Trabajos Libres Orales - Tubo Digestivo Alto I luciferase. Posteriormente, se realizaron co-transfecciones del vector con cada uno de las secuencias 3’UTR insertadas junto al mimics de los microRNAs 335-5p y 597-5p en células AGS, a las cuáles, finalmente se les midió luminiscencia. Para los controles negativos se utilizó el ensayo de mutagenesis sitio dirigido en las regiones 3`-UTR. Además se utilizó un siRNA contra la secuencia de luciferasa como control positivo. Resultados: S 118 Nuestros resultados muestran que el miR-597-5p interactúa directamente con el gen RPRM, debido a que presenta una baja actividad de luciferasa frente a su control (p ≤ 0,005). No obstante, miR-335-5p interactúa indirectamente con los genes CDH11, PLAUR y RRPM, ya que, no hubo disminución de actividad de la luciferasa frente a sus controles. Conclusión: Confirmamos que el ensayo de luciferasa como gen reportero es una herramienta sencilla y útil para la validación experimental del tipo de interacción entre un microRNA y un gen blanco de interés. Finalmente, a través del tipo de interacción que presenta un microRNA frente a un gen se puede dilucidar la participación que podría estar teniendo, dentro de las vías moleculares del CG. TL 31 E-CADHERIN INACTIVATION MECHNISMS IN SPORADIC DIFFUSE TYPE GASTRIC CANCER IN CHILEN PATIENTS Alarcón A1,2, Olivares W1,2, Bernal C1, Maturana MJ1,2, Escobar C1, Guzmán L3, Corvalán AH1. 1Laboratorio de Oncología, Centro de Investigaciones Médicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. 2Advanced Center for Chronic Disease (ACCDiS), Pontificia Universidad Católica de Chile. 3Laboratory of Biological Chemistry, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso. Introduction: Loss of expression or dysfunction of E-cadherin (CDH-1), a well-known cell adhesion and tumor suppressor protein, has been identified as the most common driver of diffuse-type gastric cancer (DGC), including sporadic and hereditary subtypes. However, somatic CDH1 mutational frequencies vary between 3-50% of sporadic cases depending on geographical locations. Moreover, second-hit CDH1 promoter hypermethylation (HM) has not been able to explain completely CDH1 inactivation in sporadic diffuse-type gastric cancer (SDGC). Objective: To screen and characterize major CDH1 inactivating mechanisms in SDGC in Chilean patients. Methods: We performed an integrative analysis of 20 Chilean SDGC cases by immunohistochemistry, mutational analysis and methylation-specific PCR. Results: Total loss of E-cadherin expression or aberrant pattern was observed in 35% (7/20) of cases. Mutational analysis revealed one case with a novel missense mutation on exon 16 (p.Ala824Ser) of uncertain clinical significance, which was consistent with a reduced CDH1 expression and HM. We also found 2 likely benign mutations (one synonymous: p.Asn751Asn; and one intronic: c.164-31T>G). The first showing normal expression and the second weak expression and HM. CDH-1 promoter HM was observed in 80% (16/20) of cases. Two cases showed weak expression but no mutation or HM. Discussion: Our results show that aberrant methylation of the CDH-1 promoter region is the most common mechanism of E-cadherin in Chilean SDGC and that mutational inactivation is an infrequent event. Grant Support: CONICYT-Fondap#15130011 and Fondecyt#1151411. TL 32 COMPARACIÓN DE MARCADORES CON ESTADIO OLGA EN UNA POBLACIÓN NO CONSULTANTE Y DE ALTO RIESGO DE CÁNCER GÁSTRICO Maturana MJ1, Estela R2, Barrientos C2, Aravena E2, García J2, Kelly M2, Araya R2, García MC2, Cerda Ch2, Corvalán A1. 1Laboratorio de Oncología- Centro Investigaciones Médicas y Advanced Center for Chronic Diseases, Pontificia Universidad Católica de Chile. 2Servicio de Gastroenterología, Instituto Oncológico, Fundación Arturo López Pérez (FALP). Introducción: El cáncer gástrico (CG) es la primera causa de muerte por cáncer en el mundo. En la actualidad se conoce que el grado de atrofia asociada principalmente a la infección por Helicobacter pylori es un factor de riesgo de cáncer gástrico. Sin embargo, el método estándar para detectar a tiempo atrofia e impedir que avance a un grado más severo sigue siendo la endoscopia digestiva alta (EDA) y su uso como prevención es generalmente limitada debido al alto costo y a lo invasivo del procedimiento. Existen marcadores de atrofia como la razón PGI/PGII que no es usado comúnmente en el área clínica. Por otro lado hemos estudiado la metilación de Reprimo (RPRM) como un posible biomarcador de cáncer gástrico. En el presente trabajo nosotros evaluamos el estadio OLGA en pacientes no consultantes y lo comparamos con la razón PGI/PGII y RPRM metilado. Métodos: Se seleccionaron 84 pacientes no consultantes provenientes de una comuna de alto riesgo de cáncer gástrico en Santiago a los que se les invitó a participar en un estudio de EDA previo a un llamado a través de la municipalidad de Puente Alto y una encuesta de selección. Los pacientes seleccionados fueron sometidos a EDA a los que se les tomó muestra de sangre y tejido. El tejido fue analizado mediante protocolo Sydney mediante clasificación OLGA y la razón PG I/PG II fue medido por Elisa con el kit Gastropanel (BioHit). El ADN fue obtenido de plasma (Qiagen) y convertido con bisulfito de sodio (Zymo Research) para detección de Reprimo metilado por Methylight. Resultados: Los resultados de OLGA en los pacientes analizados son: 21 (OLGA 0), 18 (OLGA 1), 27 (OLGA 2), 17 (OLGA 3) y 1 (OLGA 4). Diez de los 84 pacientes analizados resultaron positivos para atrofia según PGI/PGII. Tantos para los valores de PGI/PGII como de RPRM muestran una correlación conforme avanza el estadio OLGA. Conclusiones: Los resultados del presente trabajo nos indican que PGI/PGII y RPRM metilado pueden ser una alternativa para evaluar en una muestra menos invasiva previamente a los pacientes que se van a someter a una EDA. Grant Support: CONICYT-Fondap 15130011 and Fondecyt 1141511. Gastroenterol. latinoam 2016; Vol 27, Supl Nº 2: S 115-S 118
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