Gastroenterol. latinoam 2016; Vol 27; Supl. 2
Carrasco N 1, Sandoval A2, Polakovicova I3, Corvalán A3. 1Departamento de Bioquímica, Instituto de Química, Facultad de Ciencia, Pontificia Universidad Católica de Valparaíso. 2Departamento de Fisiología, Facultad de Ciencias Biológicas, Pontificia Universidad Católica de Chile. 3Departamento de Hematología y Oncología, Facultad de Medicina, Pontificia Universidad Católica de Chile.
Introducción: El cáncer gástrico (CG) es la primera causa de muerte por cáncer en Chile. Recientes investigaciones sugieren una asociación entre los microRNAs y procesos neoplásicos. Sin embargo, el estudio de la interacción de los microRNAs con sus genes blancos aún no ha sido experimentalmente validado en la mayoría de los casos, limitando el uso de los microRNAs en terapias de CG. Objetivo: Validar experimentalmente un método para identificar el tipo de interacción que posee un microRNA con un gen blanco de interés. Métodos: Las regiones 3-UTR de los genes CDH11, PLAUR y RPRM se obtuvieron mediante dos estrategias: amplificación desde ADN genómico y síntesis de novo de oligonucleótidos. Las regiones 3´-UTR fueron insertadas dentro del vector pmirGLO dual luciferase. Posteriormente, se realizaron co-transfecciones del vector con cada uno de las secuencias 3’UTR insertadas junto al mimics de los microRNAs 335-5p y 597-5p en células AGS, a las cuáles, finalmente se les midió luminiscencia. Para los controles negativos se utilizó el ensayo de mutagenesis sitio dirigido en las regiones 3`-UTR. Además se utilizó un siRNA contra la secuencia de luciferasa como control positivo. Resultados: Nuestros resultados muestran que el miR-597-5p interactúa directamente con el gen RPRM, debido a que presenta una baja actividad de luciferasa frente a su control (p ≤ 0,005). No obstante, miR-335-5p interactúa indirectamente con los genes CDH11, PLAUR y RRPM, ya que, no hubo disminución de actividad de la luciferasa frente a sus controles. Conclusión: Confirmamos que el ensayo de luciferasa como gen reportero es una herramienta sencilla y útil para la validación experimental del tipo de interacción entre un microRNA y un gen blanco de interés. Finalmente, a través del tipo de interacción que presenta un microRNA frente a un gen se puede dilucidar la participación que podría estar teniendo, dentro de las vías moleculares del CG.